Флора РЛП «Краматорський» включає більше 500 видів рослин і представлена кількома типами їх угруповань. Тут є і ділянки целинного, майже незачепленого діяльністю людини трав’янистого степу, типового для південного сходу України, унікальні ендемічні рослинні комплекси крейдяних відслонень, реліктові широколистяні байрачні ліси, а також штучно утворені хвойні лісові масиви.

Багатство фауни ландшафтного парку зумовлене різноманітністю біотопів в яких мешкають тварини. Різноманітність комах РЛП «Краматорський» оцінюється в кілька тисяч видів. Хребетних тварин налічується 183 види. При цьому 55 виявлених видів підлягають особливій охороні на території Донецької області.